鸿运国际的细胞培养条件如下：

培养条件

气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃

传代方法

第一次建议采取1:2的传代比例。传代后的细胞情况建议在2天内更换培养液。同时建议购买细胞时选择鸿运国际的组合套餐，享受较大的优惠。

细胞处理建议

收到细胞后，应及时处理，将其培养至良好状态后，使用完全培养液灌满瓶口并密封。这是运输细胞的最佳方法。

收到细胞后，可以使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后，将其放置于超净台中，严格遵循无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞状态稳定，再进行后续处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度低于80%，则将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，继续在37℃、5% CO2环境中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。贴壁细胞传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。
3. 若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，摇晃培养瓶后添加5ml完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，丢弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落。
3. 悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
4. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀，再将其加入冻存管中。
5. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，利用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放于细胞培养箱中。
4. 第二天，及时更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

注意事项

部分细胞可能在运输过程中因粘附不牢而脱落，这属正常现象。若脱离较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟以去除死细胞，再加入1-2ml胰酶进行重悬和消化处理，最后重复分瓶传代，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

选择鸿运国际，为您的细胞培养提供最佳方案和服务。