左旋咪唑是一种合成驱虫药,广泛应用于兽医学领域,主要用于治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为一种高效的驱虫药,它的靶点是线虫的乙酰胆碱离子通道受体(Martin等)。除了在医学上的应用,左旋咪唑在各种研究领域中也得到了广泛的应用,特别是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中。该药物能够有效诱导这些线虫发生瘫痪,这对于研究神经元功能和肌肉生理学而言具有重要价值。
为了深入了解毒性实验的设计,我们将提供一个利用左旋咪唑的具体例子。研究人员可以依据该示例,使用不同的药物溶液来开展自己的毒性研究。
实验材料
实验中所需材料包括:带盖的6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、左旋咪唑原液(100mM水溶)、同步成虫种群和WMicrotrackerArena设备。
实验流程
简易操作
1. 制备微孔板:根据标准操作程序制备NGM培养基;在添加盐和胆固醇后,立即将左旋咪唑加入到55°C的NGM琼脂溶液中;
2. 将左旋咪唑琼脂片未接种OP50;制备后可在两周内使用,须保存在4°C的容器中;
3. 在实验开始前,将模板降至室温进行测定。
具体步骤
1. 在NGM培养皿中培养同步的线虫种群(OP50);
2. 使用M9缓冲液将线虫从培养皿中取出,转移至15毫升无菌试管中;
3. 让线虫静止,倒出上清液,确保不扰动底部颗粒;
4. 用5ml M9缓冲液进行清洗,轻轻摇动或翻转试管;
5. 重复清洗步骤,倒出上清液后再加入3ml M9缓冲液;
6. 计数线虫样本,每10μl中计数虫数,并计算平均值;
7. 准备线虫悬浮液,以[35虫/10μl]的浓度进行后续实验;
8. 将10μl虫液转移至6孔板;
9. 使用WMicroTrackerARENA观察线虫活动。
实验结果
实验结果展示了左旋咪唑对N2运动活性的剂量抑制反应曲线。评估了不同浓度下左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔挑选35个年轻成虫N2,并在23℃下记录4小时的运动活动。数据显示为四个独立实验的平均值。
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